FRET peptide nga teknolohiya

Fluorescence resonance energy transfer (FRET)

Ang fluorescence resonance energy transfer (FRET) usa ka non-radiative energy transfer process diin ang donor excited state energy gibalhin ngadto sa acceptor excited state pinaagi sa intermolecular electric couples.Kini nga proseso wala maglakip sa mga photon ug busa dili-radiative.Kini nga assay adunay mga bentaha nga dali, sensitibo ug yano.

Ang tina nga gigamit sa FRET assay mahimong managsama.Apan sa kadaghanan sa mga aplikasyon, lain-laing mga tina ang aktuwal nga gigamit.Sa laktod nga pagkasulti, ang pagbalhin sa mahayag nga resonance nga enerhiya mao ang pagbalhin sa usa ka parisan sa mga dipoles gikan sa donor (tina 1) ngadto sa tigdawat (tina 2) kung ang grupo sa donor naghinam-hinam.Sa kinatibuk-an, ang emission spectrum sa Donor fluorophore nga grupo nagsapaw sa pagsuyup nga spectrum sa Acceptor nga grupo."Kung ang gilay-on tali sa duha ka fluorophores angay (10 - 100 A), ang pagbalhin sa enerhiya sa fluorophore gikan sa nagdonar ngadto sa tigdawat mahimong maobserbahan."Ang pamaagi sa pagbalhin sa enerhiya nagdepende sa kemikal nga istruktura sa receptor:

1. Nakabig ngadto sa molecular vibration, nga mao, ang masanag nga kahayag sa pagbalhin sa enerhiya mawala.(Ang receptor usa ka light quencher)

2. Ang emission mas grabe kay sa receptor mismo, nga miresulta sa redshift sa secondary fluorescence spectrum.”(Ang mga receptor mao ang nagdan-ag nga mga emitter).

Ang donor group (EDANS) ug acceptor gene (DABCYL) pare-parehong nalambigit sa natural nga substrate sa HIV protease, ug kung ang substrate dili ma-disconnect, ang DABCYL makapalong sa EDANS ug unya dili mamatikdan sa fluorine.Sa pag-disconnect sa HIV-1 nga protease, ang EDANS wala na mapalong sa DABCYL, ug ang EDANS luciferases mahimong mamatikdan.Ang pagkaanaa sa mga inhibitor sa protease mahimong mabantayan pinaagi sa mga pagbag-o sa intensity sa fluorescence sa EDANS.

Ang FRET peptides kay sayon ​​nga mga himan sa pagtuon sa peptidase nonspecificity.Tungod kay ang proseso sa reaksyon niini mahimong padayon nga mabantayan, naghatag kini usa ka kombenyente nga pamaagi sa pag-ila sa kalihokan sa enzyme.Ang silaw nga gihimo pagkahuman sa hydrolysis sa peptide bonds sa donor/acceptor naghatag usa ka sukod sa kalihokan sa enzyme sa mga konsentrasyon sa nanomolar.Kung ang FRET peptide wala’y labot, kini nagpakita sa kalit nga pagkawala sa internal nga flash, apan kung ang bisan unsang peptide bond nga atbang sa donor/acceptor nabuak, nagpagawas kini usa ka flash, nga mahimo’g mamatikdan nga padayon ug ang kalihokan sa enzyme mahimo’g masukod.